Математика	Физика	Химия	Биология	Техника и технологии
	Остерман Л. А. Исследование биологических макромолекул электрофокусированием, иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами. М.: Наука, 1983. 304 с. В книге продолжены детальное описание и анализ современных методов исследования, используемых в молекулярной биоло-н гии (см.: Л. А. Остерман. «Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. Электрофорез и ультрацентрифугирование», 1981 г.). Для каждого метода дано подробное описание его существа и первоначальных приемов постановки эксперимента, необходимого оборудования и реактивов, затем следует тщательный анализ влияния выбора параметров эксперимента на его результаты.-Описание метода заключает обзор всех его новейших вариантов и модификаций по материалам, опубликованным в периодической научной литературе на середину 1982 г. Книга рассчитана на биохимиков, биологов, медиков и фармакологов. Табл. И, илл. 79, библиогр. 232 назв.
ОГЛАВЛЕНИЕ Часть первая ИЗОЭЛЕКТРИЧЕСКОЕ ФОКУСИРОВАНИЕ Введение ................. 3 Глава 1 Сущность метода............... 4 Миграция белков в градиенте рН........... Амфолиты для ИЭФ.............. 7 Создание градиента рН . ............. 9 Проблема электропроводности ........... 11 Свойства продажных амфолитов........... 13 Опасность образования слоя чистой воды......... 15 Разрешающая способность. Выбор диапазона рН...... 15 Физико-химические особенности амфолитов ...._.... 18 Эндосмос.................. 19 Глава 2 Аналитические варианты ИЭФ........... 20 ИЭФ в горизонтальных пластинах ПААГ.......... 20 ПААГ для ИЭФ.............. 20 Использование мочевины и детергентов........ 24 Подготовка пластин и прибора .......... 26 Внесение препарата ............. 29 Электрический режим и время ИЭФ......... 31 Измерение рН............... 33 Окрашивание белковых зон............ 34 ИЭФ в трубках ПААГ.............. 38 ИЭФ в горизонтальных пластинах агарозы........ 42 Глава 3 Двумерное фракционирование белков ......... 45 Метод О'Фаррелла............... 45 Модификации метода О'Фаррелла........... 48 Электрофорез в формирующемся градиенте рН....... 53 Расшифровка картин двумерного фракционирования белков по методу О'Фаррелла . ............. 56 Использование ИЭФ во втором направлении........ 58 Электрофорез белков перпендикулярно градиенту рН ..... 60 Глава 4 Препаративные варианты ИЭФ........... 60 ИЭФ в слое гранулированного геля.......... 60 300 "71 Приготовление рабочего слоя геля......... —* Внесение препарата............. 63 Электрический режим ИЭФ........... <§3- , Обнаружение и элюция белков........,"... ©4 ИЭФ в градиенте плотности раствора сахарозы....... S7 Конструкция колонки............. ^7 Заполнение колонки............. в>8 "( Внесение препарата ............. С38 ' Рабочий режим ИЭФ.............S>9 Опорожнение колонки ...... ТО Специфические проблемы _______________ ...... ' J 3 Максимальная загрузка.„ . VjliemmmiC'.n.Ht 1^«„...___ Выбор полярности электродов . ........ Опасность выпадения осадков.......... Проблема растворимости............ "72 \ ---------- ........"73 J4tHVV.ll.\iuuiu..4...-----r j __ Получение амфолитов для узких диапазонов рН..... is- , Колонки фирмы «ISCO»............ 74 о Глава 5 Изотахофорез................ 75 Литература................. 79 2 Часть вторая х '-%ИММУНОЭЛЕКТРОФОРЕЗ 3 Введение................. 81 3 Глава 1 ^ Основы иммунохимии.............. 82 6 9 Защитный аппарат организма высших животных...... 82' Компоненты крови...........-. . . 82' Фагоцитоз, комплемент и цитоинтоксикация....... 84 Лейкоциты................ 86 7 Антитела................ 89 Лимфатическая система и селезенка •. . ....... 90- Затухание иммунного ответа........... 93 •1 Динамика иммунизации............ 93: Создание иммунологического арсенала......... 94 Структура иммуноглобулинов............ 95- Общий план структуры. Классы иммуноглобулинов..... 95 --------- 99 б ..... Уа п •2 Области связывания антигенов.......... „„ 7 Неоднозначность иммунного ответа ......... 101 Синтез и сборка молекул иммуноглобулинов103- " -- Клетки миеломы и гибридомы............ iu^ Получение иммунной сыворотки и очистка антител...... 105' ' Иммунизация кролика.......... 105 ' Приготовление антисыворотки........... 107 Очистка иммуноглобулина типа IgG......... ЮТ Иммуносорбенты для очистки антител........ 109 Получение моноклональных антител с помощью гибридом . . . 113 ' Продажные препараты антител........... 116 Обнаружение и оценка концентрации антител....... 117 Кольцевой тест............... 118 . Определение соотношения эквивалентности....... 119 ^ Гемагглютинация и гемолиз........... 121 Реакция связывания комплемента ......... 121 Метод Ухтерлони.............. 124 Глава 2 Использование иммунологических методов для обнаружения белковых зон после обычного электрофореза и ИЭФ........ 127 Иммунохимяческое обнаружение антигенов в самом геле .... 127 Получение иммунных «реплик»........... 128 Агарозная реплика.............. 129 Реплика на диазобумаге............ 129 Реплика на нитроцеллюлозном фильтре........ 133 Глава 3 Иммуноэлектрофорез по Грабар и Уильяме........ 134 Глава 4 Электроиммунный анализ по Лореллу.......... 139 Глава 5 Перекрестный иммуноэлектрофорез.......... 144 Метод Кларка и Фримена........... 144 147 149 150 ............. 151 Метод «слившихся ракет»............. 152 .Литература................. 154 Часть третья ИСПОЛЬЗОВАНИЕ РАДИОАКТИВНЫХ ИЗОТОПОВ Введение.................. 155 Глава 1 Изотопы, сцинтилляторы я сцинтилляционные счетчики радиоактивности 157 Радиоактивные изотопы............. 157 Избыток нейтронов............. 158 Недостаток нейтронов ............. 161 Скорость радиоактивного -распада........- . 163 Суммарная радиоактивность препарата........ 163 Удельная радиоактивность (УА).......... 164 Радиоактивные изотопы без носителя........ 165 Сцинтилляторы................ 166 Жидкие сцинтнлляторы............ 167 Спектр интенсивностей световых импульсов....... 170 Эффективность счета радиоактивности........ 170 Тушение сцинтилляции............. 171 Регистрация у-излучения. Твердые сцинтилляторы..... 172 Принципы устройства жидкостного сцинтилляционного счетчика . . 174 _-----„ -„.„Г.... „ -t-pnivjcna...... Тандемпый перекрестный иммуноэлектрофорез.......147 11.........--' -- 149 — —_______к—.......150 Введение промежуточного геля ___„_.....~... ..^FL,ltJtwinDm ишмуншлектрофорез...... Различные варианты разделения в первом направлении .... 149 Метод наложения полосы ПААГ на гель агарозы..... п---- Фотоумножитель.......... . . . 174 Линейные и логарифмические усилители ... -..... 175 Ограничение амплитуд импульсов. «Пороги»....... 177 «Шум» прибора.............. 179 Схема совпадений.............. 180 Счетные устройства............. 181 Точность счета ............... 182 Хемолюминесценция............. 183 Фотолюминесценция .... ......... 184 Флаконы для жидкостных счетчиков.........184 Черепковское излучение .............. 185 V-Счетчики с твердым сцинтиллятором..... .... 187 Регулирование (настройка) жидкостного сцинтилляционного счетчика 188 Настройка одного канала для счета одного изотопа ..... 189 Настройка двух каналов для счета двух разных изотопов . . . 191 Учет тушения при счете одного изотопа........193 Учет тушения при счете двойной метки........198 Настройка двух каналов для регистрации двойной метки (3Н и 14С) в счетчике с линейными усилителями.........201 Счет двойной метки (3Н и 1251) в жидкостном сцинтилляционном счетчике.................202 Глава 2 Способы приготовления и регистрации радиоактивных препаратов . . 203 Препараты в виде водных растворов..........203 Сцинтилляторы на основе диоксана.........203 Сцинтилляторы на основе толуола и ксилола ...... 206 Некоторые дополнительные замечания........209 Солюбилизация биологических препаратов........210 Счет радиоактивности на фильтрах..........213 Подготовка препаратов к счету .......... 213 Эффективность счета. Выход радиоактивности......217 Счет радиоактивности порошков..........220 Счет радиоактивности после ТСХ и электрофореза в геле .... 220 Растворение ПААГ в Н2Оа...........221 Растворение ПААГ без На02 с помощью солюбилизаторов . . . 221 Элюция белков и нуклеиновых кислот из геля......222 Авторадиография..............223 Непрямая авторадиография...........226 Флюорография...............227 Количественное определение радиоактивности......232: Регистрация двойной метки (3Н и 14С) в ПААГ......232 Сканирование пластинок торцевыми счетчиками......233 Регистрация радиоактивности в протекающей жидкости .... 235 Глава 3 "" --" ; Введение радиоактивной метки в белки ......... 23S Иодирование с помощью Хлорамина Т.........236 Иодирование с помощью НзОа и лактопероксидазы ...... 239 Присоединение специальных иодированных реагентов.....241 Цена: 150руб.
Назад	Заказ	На главную страницу