Математика

Физика

Химия

Биология

Техника и    технологии

Остерман Л. А. Исследование биологических макромолекул электрофокусированием, иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами. М.: Наука, 1983. 304 с. В книге продолжены детальное описание и анализ современных методов исследования, используемых в молекулярной биоло-н гии (см.: Л. А. Остерман. «Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. Электрофорез и ультрацентрифугирование», 1981 г.). Для каждого метода дано подробное описание его существа и первоначальных приемов постановки эксперимента, необходимого оборудования и реактивов, затем следует тщательный анализ влияния выбора параметров эксперимента на его результаты.-Описание метода заключает обзор всех его новейших вариантов и модификаций по материалам, опубликованным в периодической научной литературе на середину 1982 г. Книга рассчитана на биохимиков, биологов, медиков и фармакологов. Табл. И, илл. 79, библиогр. 232 назв.
ОГЛАВЛЕНИЕ
Часть первая ИЗОЭЛЕКТРИЧЕСКОЕ ФОКУСИРОВАНИЕ
Введение ................. 3
Глава 1
Сущность метода............... 4
Миграция белков в градиенте рН...........
Амфолиты для ИЭФ.............. 7
Создание градиента рН . ............. 9
Проблема электропроводности ........... 11
Свойства продажных амфолитов........... 13
Опасность образования слоя чистой воды......... 15
Разрешающая способность. Выбор диапазона рН...... 15
Физико-химические особенности амфолитов ...._.... 18
Эндосмос.................. 19
Глава 2
Аналитические варианты ИЭФ........... 20
ИЭФ в горизонтальных пластинах ПААГ.......... 20
ПААГ для ИЭФ.............. 20
Использование мочевины и детергентов........ 24
Подготовка пластин и прибора .......... 26
Внесение препарата ............. 29
Электрический режим и время ИЭФ......... 31
Измерение рН............... 33
Окрашивание белковых зон............ 34
ИЭФ в трубках ПААГ.............. 38
ИЭФ в горизонтальных пластинах агарозы........ 42
Глава 3
Двумерное фракционирование белков ......... 45
Метод О'Фаррелла............... 45
Модификации метода О'Фаррелла........... 48
Электрофорез в формирующемся градиенте рН....... 53
Расшифровка картин двумерного фракционирования белков по методу
О'Фаррелла . ............. 56
Использование ИЭФ во втором направлении........ 58
Электрофорез белков перпендикулярно градиенту рН ..... 60
Глава 4
Препаративные варианты ИЭФ........... 60
ИЭФ в слое гранулированного геля.......... 60
300
"71
Приготовление рабочего слоя геля......... —*
Внесение препарата............. 63
Электрический режим ИЭФ........... <§3- ,
Обнаружение и элюция белков........,"... ©4
ИЭФ в градиенте плотности раствора сахарозы....... S7
Конструкция колонки............. ^7
Заполнение колонки............. в>8 "(
Внесение препарата ............. С38 '
Рабочий режим ИЭФ.............S>9
Опорожнение колонки ...... ТО
Специфические проблемы
_______________
...... ' J
3 Максимальная загрузка.„ .
VjliemmmiC'.n.Ht 1^«„...___
Выбор полярности электродов . ........
Опасность выпадения осадков..........
Проблема растворимости............ "72 \
---------- ........"73
J4tHVV.ll.\iuuiu..4...-----r j __
Получение амфолитов для узких диапазонов рН..... is- ,
Колонки фирмы «ISCO»............ 74 о
Глава 5
Изотахофорез................ 75
Литература................. 79 2
Часть вторая
х '-%ИММУНОЭЛЕКТРОФОРЕЗ 3
Введение................. 81 3
Глава 1 ^
Основы иммунохимии.............. 82 6
9
Защитный аппарат организма высших животных...... 82'
Компоненты крови...........-. . . 82'
Фагоцитоз, комплемент и цитоинтоксикация....... 84
Лейкоциты................ 86
7
Антитела................ 89
Лимфатическая система и селезенка •. . ....... 90-
Затухание иммунного ответа........... 93
•1
Динамика иммунизации............ 93:
Создание иммунологического арсенала......... 94
Структура иммуноглобулинов............ 95-
Общий план структуры. Классы иммуноглобулинов..... 95
--------- 99 б
..... Уа п
•2
Области связывания антигенов.......... „„
7
Неоднозначность иммунного ответа ......... 101
Синтез и сборка молекул иммуноглобулинов103-
" --
Клетки миеломы и гибридомы............ iu^
Получение иммунной сыворотки и очистка антител...... 105' '
Иммунизация кролика.......... 105 '
Приготовление антисыворотки........... 107
Очистка иммуноглобулина типа IgG......... ЮТ
Иммуносорбенты для очистки антител........ 109
Получение моноклональных антител с помощью гибридом . . . 113 '
Продажные препараты антител........... 116
Обнаружение и оценка концентрации антител....... 117
Кольцевой тест............... 118
. Определение соотношения эквивалентности....... 119
^ Гемагглютинация и гемолиз........... 121
Реакция связывания комплемента ......... 121
Метод Ухтерлони.............. 124
Глава 2
Использование иммунологических методов для обнаружения белковых
зон после обычного электрофореза и ИЭФ........ 127
Иммунохимяческое обнаружение антигенов в самом геле .... 127
Получение иммунных «реплик»........... 128
Агарозная реплика.............. 129
Реплика на диазобумаге............ 129
Реплика на нитроцеллюлозном фильтре........ 133
Глава 3
Иммуноэлектрофорез по Грабар и Уильяме........ 134
Глава 4
Электроиммунный анализ по Лореллу.......... 139
Глава 5
Перекрестный иммуноэлектрофорез.......... 144
Метод Кларка и Фримена........... 144
147 149 150
............. 151
Метод «слившихся ракет»............. 152
.Литература................. 154
Часть третья
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ РАДИОАКТИВНЫХ ИЗОТОПОВ
Введение.................. 155
Глава 1
Изотопы, сцинтилляторы я сцинтилляционные счетчики радиоактивности 157
Радиоактивные изотопы............. 157
Избыток нейтронов............. 158
Недостаток нейтронов ............. 161
Скорость радиоактивного -распада........- . 163
Суммарная радиоактивность препарата........ 163
Удельная радиоактивность (УА).......... 164
Радиоактивные изотопы без носителя........ 165
Сцинтилляторы................ 166
Жидкие сцинтнлляторы............ 167
Спектр интенсивностей световых импульсов....... 170
Эффективность счета радиоактивности........ 170
Тушение сцинтилляции............. 171
Регистрация у-излучения. Твердые сцинтилляторы..... 172
Принципы устройства жидкостного сцинтилляционного счетчика . . 174
_-----„ -„.„Г.... „ -t-pnivjcna......
Тандемпый перекрестный иммуноэлектрофорез.......147
11.........--' -- 149
— —_______к—.......150
Введение промежуточного геля
___„_.....~... ..^FL,ltJtwinDm ишмуншлектрофорез......
Различные варианты разделения в первом направлении .... 149 Метод наложения полосы ПААГ на гель агарозы.....
п----
Фотоумножитель.......... . . . 174
Линейные и логарифмические усилители ... -..... 175
Ограничение амплитуд импульсов. «Пороги»....... 177
«Шум» прибора.............. 179
Схема совпадений.............. 180
Счетные устройства............. 181
Точность счета ............... 182
Хемолюминесценция............. 183
Фотолюминесценция .... ......... 184
Флаконы для жидкостных счетчиков.........184
Черепковское излучение .............. 185
V-Счетчики с твердым сцинтиллятором..... .... 187
Регулирование (настройка) жидкостного сцинтилляционного счетчика 188
Настройка одного канала для счета одного изотопа ..... 189
Настройка двух каналов для счета двух разных изотопов . . . 191
Учет тушения при счете одного изотопа........193
Учет тушения при счете двойной метки........198
Настройка двух каналов для регистрации двойной метки (3Н и 14С)
в счетчике с линейными усилителями.........201
Счет двойной метки (3Н и 1251) в жидкостном сцинтилляционном счетчике.................202
Глава 2
Способы приготовления и регистрации радиоактивных препаратов . . 203
Препараты в виде водных растворов..........203
Сцинтилляторы на основе диоксана.........203
Сцинтилляторы на основе толуола и ксилола ...... 206
Некоторые дополнительные замечания........209
Солюбилизация биологических препаратов........210
Счет радиоактивности на фильтрах..........213
Подготовка препаратов к счету .......... 213
Эффективность счета. Выход радиоактивности......217
Счет радиоактивности порошков..........220
Счет радиоактивности после ТСХ и электрофореза в геле .... 220
Растворение ПААГ в Н2Оа...........221
Растворение ПААГ без На02 с помощью солюбилизаторов . . . 221
Элюция белков и нуклеиновых кислот из геля......222
Авторадиография..............223
Непрямая авторадиография...........226
Флюорография...............227
Количественное определение радиоактивности......232:
Регистрация двойной метки (3Н и 14С) в ПААГ......232
Сканирование пластинок торцевыми счетчиками......233
Регистрация радиоактивности в протекающей жидкости .... 235 Глава 3 "" --" ;
Введение радиоактивной метки в белки ......... 23S
Иодирование с помощью Хлорамина Т.........236
Иодирование с помощью НзОа и лактопероксидазы ...... 239
Присоединение специальных иодированных реагентов.....241

Цена: 150руб.

Назад

Заказ

На главную страницу

Hosted by uCoz